Komórki skóry jako model do badania konsekwencji mutacji w genach powodujących dziedziczne dystrofie siatkówki.

Symbol
1M15
Rok początku realizacji
2017
Tytuł projektu
Komórki skóry jako model do badania konsekwencji mutacji w genach powodujących dziedziczne dystrofie siatkówki.
Instytucja finansująca
Kierownik
dr n. med. Aneta Ścieżyńska
Numer umowy o dofinansowanie
UMO-2016/23/N/NZ5/02588
Przyznane środki ogółem TYLKO WUM
96 000,00
Przyznane środki ogółem NA WSZYSTKICH
96 000,00
Cel projektu

Wyniki wysokoprzepustowego sekwencjonowania DNA uzyskane od pacjentów z dziedzicznymi chorobami siatkówki ujawniły ogromną liczbę wariantów genetycznych o nieznanym znaczeniu klinicznym. Pilna potrzeba dalszych badań molekularnych mających na celu weryfikację patogenności tych wariantów, krzyżuje się z brakiem dostępu do siatkówki, części oka bezpośrednio dotkniętej chorobą. W związku z nowymi odkryciami wskazującymi na ekspresję genów ludzkiej siatkówki również w skórze, uważamy, że komórki skóry mogą stanowić dobry model do badania przetwarzania zmutowanych genów odpowiedzialnych za rozwój dystrofii siatkówki. W niniejszej pracy zamierzamy swą uwagę skupić na genie ABCA4, który jest jednym z głównych genów siatkówki i odpowiada za patomechanizm wielu jej chorób dziedzicznych. Naszym głównym celem jest określenie składu transkryptów ABCA4 i zbadanie ekspresji tego genu na poziomie mRNA i białka w mieszkach włosowych, keratynocytach i fibroblastach. Na potrzeby realizacji tego zadania z pobranych biopsji skóry zostaną założone pierwotne hodowle keratynocytów i fibroblastów. Naszym kolejnym celem będzie porównanie danych eksperymentalnych, aby wybrać i wdrożyć najbardziej odpowiedni typ komórek do badania metabolizmu zmutowanego genu ABCA4 u pacjentów.
W celu realizacji przedstawionych celów zostanie przeprowadzona analiza jakościowa transkryptów z zastosowaniem techniki szybkiej amplifikacji końców cDNA (RACE) oraz sekwencjonowania cDNA. Ilościowa ekspresja genu ABCA4 na poziomie mRNA i białka zostanie zmierzona z użyciem odpowiednio metody PCR w czasie rzeczywistym oraz metody Western Blot.
Spodziewanym efektem niniejszej pracy będzie analiza wpływu mutacji ABCA4 na proces jego przetwarzania i weryfikacja patogenności tych zmian w środowisku wewnątrzkomórkowym. Ponadto po raz pierwszy zostaną zidentyfikowane sekwencje transkryptów ABCA4 w różnych typach komórek skóry. Jesteśmy przekonani, że model zaproponowany w tych badaniach zostanie z powodzeniem wdrożony do analizy mutacji także innych genów siatkówki zaangażowanych w rozwój szerokiego spektrum dystrofii tylnej części oka i może stanowić punkt wyjścia do dalszych badań mających na celu odkrycie roli ABCA4 w skórze.